Principe de la chromatographie
Technique de séparation des substances présentes dans un mélange. Elle utilise la migration d’un liquide (le solvant) sur un support solide (un plaque de silice). Les constituants du mélange sont entraînés plus ou moins loin suivant leurs propriétés physico-chimiques : masse, polarité, solubilité…
Matériel
- Solutions à 20 g.L-1 (10 ou 20 cm3 suffisent) dans de petits béchers: de Fructose; Saccharose; Glucose; Maltose
- Plants de courge : la sève contient essentiellement du saccharose
- Et/ou Feuilles de figuier et figues sur tige coupées 1h avant le TP
- Et/ou grains de raisin
- 5 pipettes Pasteur en verre (1 par solution de sucre + 1 pour la sève ou le jus de fruit) ou 5 cure dent
- Plaques à chromatographie sur gel de silice format 7×9 cm (placer les plaques à chromatographie quelques heures avant ou la veille 30 min dans une étuve à 100°C pour les « réactiver »)
- Révélateur dans deux grands cristallisoirs: Permanganate de potassium à 2% et sodium carbonate anhydre à 4%, mélangé à 50% dans chaque cristallisoir
- Matériel pour extraire le jus des grains de raisin (entonnoir et son support, marteau, pilon, bécher)
- Papier Sopalin
Solvant pour chromatographie sur gel de silice
- Du butanone
- De l’acide acétique
- De l’éthanol 20%, ce qui évite de sécher les plaques sous la hotte
Matériel par groupe
- Cuve à chromatographie avec 6 à 8mm de solvant
- Des gants
- Sèche-cheveux
L’atmosphère de la cuve, remplie d’un mélange de solvant doit être saturée de vapeurs (ne pas l’ouvrir inutilement).
1/ Préparez la plaque de gel de silice sur support aluminium
- Touchez-la uniquement par la tranche pour ne pas y déposer de substances organiques;
- Faites au crayon à papier un trait fin à 1,5 cm du bas de la plaque (n’appuyez pas trop pour ne pas enlever le gel de silice);
- Faites 5 repères et marquez-les : F pour fructose, S pour saccharose, G pour glucose, M pour Maltose, E pour sève élaborée.
2/ Réalisez les dépôts
- A l’aide de la pipette déposez 3 fois une micro-goutte de solution de sucre et de sève élaborée sur chaque repère (laissez sécher entre chaque dépôt si nécessaire, chaque tache doit être la plus fine possible).
- Placez la plaque dans la cuve en vérifiant que les dépôts de sucre sont bien situés au-dessus du niveau du solvant
- Fermez et laissez migrer le solvant pendant 8 à 12 minutes
- Arrêtez la migration lorsque le solvant se situe à 1 cm du haut de la plaque
3/ Révélez les différents sucres :
- Sortez la plaque de la cuve avec la pince
- A votre paillasse, marquez d’un trait de crayon le front du solvant
- Avec la pince, plongez la plaque dans le cristallisoir contenant le révélateur durant 10s environ
- Sortez-la puis posez-la sur une feuille de papier Sopalin
- Séchez la plaque au sèche-cheveux
- Les sucres se colorent en jaune avec le permanganate alors que le reste de la plaque devient violet.
- Identifiez les sucres
Exemples de résultats
