Les rayons Ultra-Violet B sont suspectés d’être mutagènes chez l’humain qui accumule les coups de soleil en été. Mutations après mutations, les grains de beauté deviennent des cancers de la peau.
On les appelle mélanome (voir photo ci-dessus). C’est la 1ere cause de mortalité chez la femme de moins de 30 ans.
Encore faut-il le montrer !
Objectif de ce TP : montrer que les rayons UV provoquent des mutations.
Comme on ne peut pas faire d’expériences sur les humains, on prend un être vivant plus simple et plus facile à cultiver. Un champignon unicellulaire, la Levure de boulanger.
La souche de levure Ade 2 forme normalement des colonies rouges (voir photo de gauche ci-dessus) lorsqu’elle se développe sur un milieu nutritif.
Ce caractère héréditaire, la couleur rouge, est dû au fait que cette levure possède un allèle particulier du gène de la « couleur de la colonie » nommé Ade2.
La manipulation consiste à étaler des levures sur une boîte de Pétri.
Puis on les expose à des durées croissantes d’irradiation aux UV-B.
L’action des UV-B se fait sur des cellules de levure isolées mais le résultat est visible à l’œil nu au niveau des clones.
Un clone est un amas de cellules identiques issues de la division d’une même cellule-mère.
Après 5 jours de développement, une levure va former une colonie.
Matériel :
- Un étaleur stérile
- Une pipette Pasteur stérile
- Une boîte de Pétri avec gélose stérile
- Un bec électrique
- Un feutre
- Du scotch
- Une MUTA-BOX produisant un rayonnement UV-B
- Une solution contenant une suspension de levure de la souche Ade-2
Méthode :
Le travail se fait en condition de stérilité:
- Attachez vos cheveux, enlevez vos bagues et bracelets
- Lavez-vous les mains avec du gel hydroalcoolique
- Allumez le bec électrique
- Travaillez dans un rayon de 20 cm autour du bec électrique
- Ne parlez pas
- Portez un masque
- Ne vous déplacez pas
- Ne posez pas d’ustensiles sur la table qui a été stérilisée à l’eau de javel
- En fin de manipulation, placez tous les instruments dans l’eau de javel
- Éteignez les bec électriques
Étalement des levures :
- Notez au feutre, au dos de chaque boîte votre nom
- Partagez le fond de la boîte en 4 secteurs (voir photo) correspondant à 4 temps d’exposition : 0s, 20s, 40s, 60s.
- Agitez la suspension de levures
- Ouvrez la boîte en déposant le couvercle à proximité du bec électrique
- Avec une pipette Pasteur stérile, versez 2 gouttes au centre de la boîte
- Avec un étaleur stérile, étalez les gouttes d’un mouvement circulaire répété comme si c’était de la pâte à crêpe
- Refermez rapidement la boîte
- Posez-la à l’envers sur le plan de travail
- Mettez l’étaleur dans l’eau de Javel
Irradiation des levures :
- Déplacez les boîtes vers la MUTA-BOX
- Ouvrez le tiroir de la MUTA-BOX
- Placez 2 boîtes
- Enlevez les couvercles et placez-les à l’envers à côté de la boîte de Pétri dans le tiroir
- Placez les couvercles dont un secteur a été découpé de façon à irradier seulement la partie que vous souhaitez irradier
- Refermez le tiroir
- Réglez la durée d’irradiation voulue
- Appuyez sur le bouton démarrage
- A la fin, recommencez avec un autre secteur à irradier
- Lorsque tous les secteurs sont irradiés, replacez les couvercles d’origine
- Sortez les boîtes
- Refermez le tiroir
- Scotchez votre boîte
- Déposez-la dans la cuvette prévue a cet effet
En attendant que tout le monde ait fait ses irradiations, identifiez la mutation provoquée par les rayons U.V.
Identification d’une mutation:
- Ouvrez le logiciel genigen2 en ligne: pour cela, dans un moteur de recherche, tapez « Geniegen2 »
- Afficher les séquences des allèles « Ade2Allele1.adn » et « Ade2Allele2.adn » en ouvrant le fichier « ade2.edi »
- Rappel : le gène ade2 est responsable de la couleur. L’allèle 1 est l’allèle responsable de la couleur rouge. L’allèle 2 est l’allèle responsable de la couleur blanche.
- Utiliser l’outil pour afficher le résultat de la comparaison des 2 allèles
- Identifiez la mutation: l’endroit sur le gène et le changement opéré
QCM:
Il n'y a qu'une seule bonne réponse
Rédigez un compte-rendu:
A la prochaine séance.
- Récupérez vos boites
- Prenez une photo
- Comptez le nombre de colonies rouges et blanches pour chaque temps d’exposition (utilisez les deux boites pour des résultats statistiquement significatifs)
- Présentez un tableau de résultats
- Tracez le graphique du nombre de colonies rouges et blanches en fonction du temps d’exposition
- Analysez votre graphique
- Montrez que les rayons UV provoquent des mutations peuvent être létales (=mortelles)
Envoyez votre compte-rendu en PDF avec vos noms
Productions d’élèves :
