Les levures sont des êtres unicellulaires eucaryotes du groupe des champignons. Nous avons obtenu des levures sans réserve de glucose intracellulaire en diluant 10g de levures de boulanger dans un litre d’eau distillée que nous avons mis en culture plusieurs jours dans une eau oxygénée par un bulleur d’aquarium.
Nous allons fournir du glucose aux levures et suivre son devenir dans différentes conditions.
Expérience 1 :
Matériel pour groupe de 2 élèves:
- 1 solution de levures fraîches à 10g/l
- 1 bain Marie fixé à 35°C
- 5 tubes à essai de 20ml
- De l’eau distillée en pissette
- 1 solution de glucose 100g/l soit 10%
- 2 bouchons à tube à essai
- 1 feutre
- Des bandelettes-test de glucose
- Une seringue 20ml
- 1 Microscope de biologie
- Une lame quadrillée de type Malassez
Méthode:
- Préparez 5 tubes à essai que vous numéroterez avec le feutre
- Laisserez incuber à 30°C dans les conditions décrites ci-dessous :
| N° de culture | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Suspension de levure | 0ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml |
| Eau distillée | 15ml | 15ml | 10ml | 15ml | 10ml |
| Oxygénation | Oui | Non | Non | Oui | Oui |
| Glucose (100g/l) | 5ml | 0ml | 5ml | 0ml | 5ml |
| Résultats glucose (-/+/++/+++) |
Après une heure de culture, testez la teneur en glucose à l’aide de bandelettes test.
Expérience 2 :
Pendant ce temps, nous étudierons les variations de dioxygène dans un culture de levures non oxygénée à qui l’on vient de donner du glucose en début d’expérience.
Matériel pour 1 groupe:
- 1 Bioréacteur ou cytoréacteur
- 1 sonde à O2
- 1 sonde à éthanol
- 1 Suspension de levures affamées : 20ml
- Bouchons pour bioréacteur
- 1 agitateur magnétique
- 1 seringue 1ml
- 1 Solution de glucose à 1% soit 100g/l
Méthode :
- Introduire 20ml de suspension de levure dans le bioréacteur
- Mettre l’agitateur magnétique à faible vitesse
- Fermer le bioréacteur avec son couvercle
- Bouchonner tous les trous sauf ceux des sondes
- Introduire la sonde à O2 dans son trou
- La sonde à éthanol dans le sien
- Veiller à ce qu’elles ne touchent pas l’agitateur magnétique
- Ouvrir le logiciel Latisbio à partir de la fenêtre de recherche de l’ordinateur
- Choisir O2 et éthanol dissous
- Indiquer 12 minutes
- Lancer la mesure en appuyant du F10
- Ajuster la fenêtre d’enregistrement en double-cliquant sur O2 dissous (ou éthanol) écrit au niveau de l’axe des ordonnées
- Remplissez la seringue d’1ml de glucose 1%
- Comme les docteurs, tapotez sur le plastique pour faire partir l’air car on ne veut pas injecter du dioxygène ; au besoin, orientez la seringue vers le haut puis poussez le piston pour faire sortir l’air
- Au bout d’1 min, injectez lentement 1ml de solution de glucose 1% avec la seringue
Observation microscopique :
- Posez une goutte de la suspension de Levure sur une lame quadrillée
- Recouvrez d’une lamelle
- Posez-la sur la platine du microscope
- Prenez des photos à fort grossissement
