Vous avez entendu parler des tests PCR ou de la molécule d’ARN dans le cas du nouveau vaccin.
Ce TP vous propose d’extraire de l’ADN et de l’ARN des cellules de banane.
Où va-t-on aller chercher ces deux molécules et comment allons-nous le faire?
Matériel
Vérifiez si tout est disponible avant de commencer les manipulations:
- Lunettes de protection obligatoire si pas de lunettes de vue
- De la banane: un petit morceau est suffisant
- De l’alcool dénaturé, dans un tube à essai
- Du liquide vaisselle
- Du sel fin
- Un bécher d’eau distillée
- Des filtres à café
- Un entonnoir
- Un mortier et son pilon
- Une cuillère à café (spatule)
- Un couteau ou scalpel
- 3 béchers: l’un avec l’eau, l’autre avec le sel, et le 3e avec le liquide vaisselle.
- 2 tubes à essai (dont un contenant l’alcool)
- 1 porte tube-à-essai
- Une éprouvette graduée
- Du vert de méthyle pyronine
- Une poubelle de paillasse
Méthode
1/Séparez les cellules d’un morceau de banane
- Enlevez la peau
- Jetez-la dans la poubelle de paillasse
- Découpez un morceau de banane grâce au scalpel
- Rajoutez de l’eau
- Broyez en tournant le pilon dans le mortier jusqu’à ce que ça devienne liquide
Cette opération permet de casser les fibres du fruit et ainsi de séparer les cellules.
Vous obtenez une pâte homogène, liquide et sans morceau de fruit.
La pâte de banane est obtenue, il faut maintenant briser les cellules pour en extraire l’ADN.
2/Extraire l’ADN des cellules
Pour cela:
- Ajoutez une cuillère à café de sel.
- Mélangez bien avec le pilon pour que le sel se dissolve dans la pâte de banane
- Ajoutez maintenant 3 cuillères à café de liquide vaisselle
Mélangez à nouveau grâce au pilon : le mélange devient mousseux, c’est normal.
- Ajoutez maintenant 20 cuillères à café d’eau distillée.
- Mélangez une dernière fois afin que la banane, le sel, le liquide vaisselle et l’eau constitue une préparation homogène.
- Placez le filtre à café dans l’entonnoir (un filtre, ça s’ouvre…)
- Posez le tout sur l’éprouvette graduée.
- Versez la mixture dans le filtre à café et laissez maintenant filtrer la préparation.
- Après quelques minutes d’attente, vous obtenez le filtrat pur que l’on appellera de l’essence de banane
Pendant l’attente, calculez le grossissement réalisé pour chaque niveau moléculaire
3/Faites apparaitre l’ADN comme par magie
- Versez l’essence de banane dans le 2eme tube à essai sans dépasser la moitié du tube.
- Évaluez, à vu d’œil, un volume d’alcool équivalent à la moitié du volume d’essence de banane.
- Versez délicatement l’alcool sur les parois du tube à essai contenant l’essence de banane.
Les deux liquides ne se mélangent pas car ils n’ont pas la même densité.
En très peu de temps, un ou deux anneaux blanchâtres se forment : les molécules d’ADN se regroupent en pelotes blanches autour de protéines.
4/Colorez l’information génétique
- ajoutez 1 goutte de colorant vert de méthyl pyronine qui colore l’ADN en vert et l’ARN en rose sans colorer les protéines.
Que s’est-il passé ?
Où est situé l’A.D.N ?
Comment expliquer le phénomène observé ?
Première étape : le rôle du sel
- Le sel est hydrophile, il a donc absorbé une partie de l’eau contenue dans les cellules de la banane. De plus, il a la capacité de séparer l’ADN de certaines protéines. Après ce premier stade, l’ADN est isolé mais toujours prisonnier de la cellule.
Seconde étape : L’ajout du liquide vaisselle
- Pour libérer l’ADN, il faut le faire sortir du noyau et de la cellule. Il faut donc faire disparaître les membranes cellulaires. Or, ces dernières sont essentiellement constituées d’huile (lipides). Comme le liquide vaisselle détruit les résidus gras sur les verres et les assiettes, il est aussi capable d’éliminer les lipides composant les membranes cellulaires et ainsi de libérer les molécules d’ADN.
Dernière étape : l’alcool
- L’alcool permet aux molécules d’ADN de se rassembler en pelotes. Ce phénomène est observable car l’ADN ne peut se dissoudre dans l’alcool. C’est pourquoi aujourd’hui, on choisit de conserver les spécimens dans de l’alcool plutôt que dans du formol qui détruit l’ADN. Les pelotes d’ADN restent entre l’alcool et l’essence de banane : c’est une question de densité des liquides.
Résultats
A partir de 2 expériences ci-dessous, essayez de représenter la membrane plasmique d’une cellule:
PDF de cette expérience ci-dessous:
Une réflexion sur “TP SVT/Extraire l’ADN d’une banane”