TP de type E.C.E
Comment récupérer facilement ce TP ?
Le déficit immunitaire combiné sévère lié à l’X (DICS-XI) est une maladie
génétique rare qui provoque une déficience des moyens de défense contre les infections, liée au défaut de développement des lymphocytes T. En l’absence de traitement, le DICS-XI provoque le décès dans la première année de vie, l’enfant étant sensible à toutes les maladies, même les plus bénignes. C’est pour cette raison qu’on les place dans une bulle stérile.
La cause précise de cette maladie est aujourd’hui connue. Un défaut d’expression ou de fonction d’une protéine dénommée gamma-c, exprimée à la surface des cellules précurseurs des lymphocytes bloque leur différenciation. Cette protéine gamma-c agit comme un récepteur de signaux nécessaires à cette différenciation.
En l’absence de traitement, le DICS–XI provoque le décès dans la première année de vie. Depuis plus de 30 ans, il est possible de traiter avec succès cette maladie par greffe de moelle osseuse provenant d’un donneur familial qui partage les mêmes antigènes tissulaires d’histocompatibilité HLA. Malheureusement, cette possibilité ne concerne que 20 % des patients. Il est possible de traiter les autres patients par une greffe de moelle osseuse provenant d’un donneur moins compatible (en général un parent). Cette forme de traitement présente cependant de nombreuses limites : risque de mortalité de l’ordre de 20 à 30 % , reconstitution incomplète des défenses immunitaires nécessitant, dans la majorité des cas, la poursuite de traitements, déclin à moyen/long terme de ces défenses chez certains patients.
Un traitement par thérapie génique a été mis au point à partir des années 2000. Il a consisté à ajouter aux cellules précurseurs des lymphocytes une copie fonctionnelle de l’allèle muté à l’origine de la maladie.
Afin de rendre compte de l’efficacité du traitement, les petits patients ont été vaccinés.
Problème à résoudre
On cherche à savoir, par dosage des anticorps circulants des patients, si la thérapie génique permet au système immunitaire de répondre efficacement lors d’une vaccination.
Ressource:
La vaccination
La vaccination consiste à injecter un agent antigénique dans le but de stimuler le développement d’une immunité adaptative naturelle.
La substance active d’un vaccin est un antigène non pathogène injecté à plusieurs reprises. Un individu sera considéré comme vacciné si, après avoir reçu un rappel du vaccin, son immunité adaptative peut s’activer de la façon la plus rapide et la plus forte possible
Le test de Mancini
Mancini a mis au point une méthode pour évaluer la concentration d’une solution d’anticorps. Le test de Mancini est fondé sur le principe d’immuno-diffusion radiale. Une gélose contenant des antigènes (Ag) est coulée dans une boite de pétri. Les anticorps (Ac), déposés dans les puits creusés dans la gélose, diffusent de façon homogène dans toutes les directions autour des puits. Les anticorps en réagissant avec les antigènes vont former un anneau de précipitation blanc autour des puits. Les anticorps diffusent d’autant plus vite et loin dans la gélose qu’ils sont en solution concentrée.
Ainsi, plus le sérum contient d’anticorps, plus l’anneau de précipitation a un rayon important (voir résultat ci-dessus).
Matériel :
- Sérums de différents patients
- Fiche technique du dosage des anticorps grâce au test de Mancini
- Une boîte de Pétri avec gélose contenant des antigènes
- Un tube emporte-pièce et un cure-dent
- Un marqueur (pour marquer la boîte de Pétri)
- Un compte-goutte pour chaque sérum
- Un récipient poubelle
- Une petite feuille de papier noir
- Une règle
Méthode:
Afin de chercher si la thérapie génique permet au système immunitaire des patients de répondre efficacement lors d’une vaccination :
- Réalisez des dosages d’anticorps selon la description du test de Mancini proposée ci-dessus
- Proposez au professeur un protocole à valider
ECE, Modèle 2 : exercer un sens critique dans la partie B
Partie A:
- Analyser un problème, s’approprier une stratégie fournie de résolution et en prévoir les résultats
- Mettre en œuvre un protocole dans le respect des consignes de sécurité et dans le respect de l’environnement
Partie B:
- Communiquer ses résultats et interpréter
- Exercer un sens critique vis-à-vis des résultats obtenus et/ou fournis
- Conclure
Exemples de résultat:
Rédigez un compte-rendu
- nom et prénom
Le coin du labo:
Gélose pour 200ml (environ 10 boites)
- 2 g d’agar
- 100ml eau distillée
- 100 ml ZnSo4 à 1 mol/l
Préparation classique de l’agar mais avec une moitié d’eau distillée puis hors chauffage rajouter l’autre moitié en ZnSo4.
La gélose semble plus liquide que d’habitude mais elle se solidifie normalement.
Solutions de NaOH à différentes concentrations :
- C1 1 g/l
- C2 5 g/l
- C3 15 g/l
- C4 30 g/l
Lecture des résultats
- 30 minutes à température ambiante
- 15 à 20 minutes à l’étuve 30°
Sources
file:///Users/michelpatalano/Downloads/ECE_19_SVT_52v1_b6b2454427.pdf
