Principe de l’électrophorèse d’ADN:
En milieu basique, les molécules d’ADN sont chargées négativement. Soumises à un champ électrique, elles migrent, dans un gel conducteur, de la cathode (borne négative) vers l’anode (borne positive). La distance de migration par rapport à la ligne de dépôt est caractéristique de la taille et de la charge de la molécule.
Préparation de la cuve:
- Poser la cuve sur le papier noir (les puits dans le gel seront plus visibles).
- Placer le gel dans la cuve sans le casser, bien parallèlement aux côtés de la cuve, les puits devant être du côté de la cathode (borne négative)
- Verser le tampon TBE dans les deux compartiments de la cuve, le gel doit être tout juste recouvert (environ 1mm au dessus du gel).
Dépôts d’ADN:
ATTENTION! Il faut réaliser les dépôts en stabilisant le mouvement par calage des coudes sur la paillasse et veiller à ne pas percer le fond du puits et à changer les embouts entre chaque dépôt.
1. Déposer avec une micropipette une solution d’ADN dans un puits sans débordement : la cuve utilisée nécessite un volume d’ADN de X μL.
2. Déposer, de la même manière, dans un deuxième puits à coté du précédent la deuxième solution d’ADN.
3. Si le dépôt ne paraît pas satisfaisant (débordement par exemple), un second essai peut être réalisé dans les puits situés à côté. Dans ce cas, bien repérer les puits conservés pour l’électrophorèse
Mise en route et migration (la migration doit avoir lieu juste après les dépôts):
- Brancher la cuve au générateur et faire migrer à 100 volts. Le pôle négatif (= cathode) doit être du côté du dépôt.
- Vérifier le bon déroulement de l’électrophorèse : de la buée doit apparaître sur le couvercle dans les cinq premières minutes si le générateur et la cuve sont bien alimentés
