La famille Robinson:
La famille Robinson a réalisé des tests génétiques après une consultation médicale de leur fille en bas âge, Marie, dont on soupçonne qu’elle soit atteinte de Drépanocytose.
La Drépanocytose est une maladie héréditaire qui se manifeste par des difficultés respiratoires. Les globules rouges responsables du transport du dioxygène présentent une forme en demi-lune alors qu’habituellement ils sont ronds.
Jacqueline: Jacqueline est une femme de 32 ans née à Port-au-Prince, Haïti. Elle a immigré aux États-Unis avec sa famille à l’âge de 5 ans. Elle ne rapporte aucun antécédent médical anormal autre qu’une migraine occasionnelle. Elle a trois sœurs, qui sont toutes en bonne santé. Le frère aîné de Jacqueline est décédé d’une pneumonie à l’âge de 1 an alors que la famille vivait toujours en Haïti. Jacqueline est d’origine africaine. Jacqueline ne croit pas qu’elle a déjà été testée pour la drépanocytose
Cory: Cory est un homme de 32 ans qui est né et a grandi aux États-Unis. Cory ne rapporte rien d’anormal dans ses antécédents médicaux. Cory a deux sœurs aînées qui n’ont rien d’anormal dans leurs antécédents médicaux. Cory est principalement d’ascendance africaine. Cory n’a jamais été testé pour la drépanocytose.
Samuel: Samuel est un garçon en bonne santé de 4 ans. Jacqueline rapporte que sa grossesse du petit Samuel était normale et qu’il n’a pas eu de maladie majeure. Samuel n’a pas montré
d’anomalies dans ses dépistages courants.
Marie: Marie a 2 mois. Jacqueline rapporte que sa grossesse de la petite Marie était normale. Un programme de dépistage prénatal a révélé de faibles niveaux de l’hémoglobine dans le sang de Marie et on lui a fait des tests.
Objectif du TP
Il s’agit d’une simulation permettant l’analyse des échantillons d’ADN d’une famille de quatre personnes qui ont été soumises à des tests génétiques pour la drépanocytose. L’ADN fourni représente un produit de PCR de 400 paires de bases amplifié à partir du gène de la bêta-globine. Ce produit de PCR a été incubé en présence de la restriction enzyme DdeI à 37°C. Le kit consiste à analyser les échantillons d’ADN sur un gel d’électrophorèse afin de déterminer si les membres de la famille sont porteurs de la mutation de la drépanocytose et évaluer en outre s’ils sont affectés par drépanocytose ou trait de drépanocytose.
Le port de gants, lunettes et blouse est conseillé
Matériel
- 1 échantillon d’ADN de Jacqueline Robinson 150 μl (ADN de synthèse)
- 1 échantillon d’ADN de Cory Robinson 150 μl (ADN de synthèse)
- 1 échantillon d’ADN de Samuel Robinson 150 μl (ADN de synthèse)
- 1 échantillon d’ADN de Marie Robinson 150 μl (ADN de synthèse)
- ADN échelle 100 μl
- un gel Agarose
- un Agent de coloration d’ADN sur gel (Safegreen ou GelGreen ™)
- un Tampon d’électrophorèse sur gel (TBE 1X)
- des Microtubes de 1,5 ml
Dépôts des échantillons d’ADN sur le gel
- Puits 1: 10 μL de marqueur de taille d’ADN
- Puits 2: 15 μL de l’échantillon Jacqueline
- Puits 3: 15 μL de l’échantillon Cory
- Puits 4: 15 μL de l’échantillon Samuel
- Puits 5: 15 μL de l’échantillon Marie
En cas d’utilisation du peigne à 13 puits : déposer maximum 10 μL
En cas d’utilisation du peigne à 9 puits : déposer maximum 18 μL
g. Placez le couvercle sur la cuve à électrophorèse
h. Assurez-vous que les bornes des électrodes sont bien en place
i. Avec une cuve autre que BLUEGEL : réglez la tension à 100-130V et procédez à une
électrophorèse pendant 15 à 20 minutes ou jusqu’à ce que le colorant de charge ait
progressé jusqu’à environ la moitié de la longueur du gel
j. si vous utilisez blueGel ™, appuyez simplement sur le bouton «Run». Vous pouvez
également allumer la lumière et suivre la migration en temps réel.
k. Vérifiez que de petites bulles se forment près des bornes dans la boîte
l. Des temps d’électrophorèse plus longs donneront une meilleure résolution de taille
m. Une fois l’électrophorèse terminée, mettez l’appareil hors tension et retirez le gel de la
boîte.
Détermination de la taille et interprétation
a. Placez le gel sur le transilluminateur à lumière bleue
Si vous utilisez blueGel ™, appuyez simplement sur le bouton de l’illuminateur.
Si vous utilisez une lampe à UV (déconseillé), couvrez toute la peau exposée et couvrez les
yeux avec des lunettes de protection anti-UV.
b. Vérifier la présence du produit PCR (fluorescent)
c. Assurez-vous que la résolution de la bande d’ADN est suffisante dans la plage de 100 à
300 paires de bases (pb) de l’échelle d’ADN à 100 pb.
a. Faites migrer plus longtemps si nécessaire pour augmenter la résolution
b. Le marqueur de poids doit ressembler approximativement à l’illustration
c. Prendre en photo le gel
d. Avec BLUEGEL : placer la chambre noire, permet de prendre facilement une belle
photo
Comprendre et enseigner les sciences naturelles 