TP : découvrir l’amylase de la banane

Une banane verte, beurk, c’est pas bon, alors qu’une banane jaune et mûre, c’est délicieux! La différence, c’est son goût sucré.

Pourquoi donc est-ce que la banane verte n’a pas un gout sucré contrairement à la banane mûre ?

C’est ce que ce TP se propose de montrer à plusieurs niveaux d’organisation :

• Au niveau cellulaire : par la préparation et l’observation cellulaires de pulpe de banane ;
• Au niveau moléculaire : en réalisant une expérience sur gel d’amidon.

Matériel :

• Des bananes vertes (les moins mûres possibles)
• Des banane mures 
• De l’eau iodée 
• De l’eau distillée dans un tube Eppendorf
• Une Boite de Pétri 
• 1g d’agar-agar 
• 1g d’amidon déjà pesé dans un tube Eppendorf 
• Une solution d’amidon à 2g/l dans un ballon de 0,5l
• 2 béchers : un de 140ml et l’autre de 50ml
• Un Mortier et un pilon 
• 4 Tubes à essais sur portoir 
• Un agitateur en verre
• Pastilles (rondes) papier absorbant de la taille d’une tranche de banane
• Une Balance
• Une éprouvette
• Un scalpel
• De l’amylase dans un tube Eppendorf
• Une pipette plastique
• De la Liqueur de Fehling
• Un Microscope
• Lame et lamelle
• Un feutre
• Pinces fines
• Un bain marie à 70°C
• 1 entonnoir et papier filtre

Méthode :

Préparation des boites de pétri avec gel d’amidon (durée: 40 minutes)

• Allumer le bec électrique sur 5
• Peser 1g d’agar-agar
• Introduire ce gramme d’agar-agar dans 100ml d’eau du robinet
• Faites chauffer sur le bec électrique
• Agiter continuellement.
• Retirer de la source de chaleur quand la solution est translucide.
• Ajouter 1g d’amidon dans la solution bien chaude et bien remuer, voire écraser le grumeau d’amidon sur la paroi.
• Verser dans une grande boite de Pétri un peu de solution et faire des mouvements circulaires pour obtenir un gel d’amidon de la hauteur de la boîte
• Laisser refroidir, boite fermée, à température ambiante.

Expérience 1:

Cette expérience permet de tester la production d’amylase par la banane en fonction de son degré de murissement. (durée: 20 minutes)

• Déposez sur le gel d’amidon une tranche de banane mûre et une tranche de banane verte.
• Veillez à ce que les tranches soient approximativement de la même taille, épaisseur et diamètre, pour pouvoir comparer les résultats.
• Déposez sur le gel une pastille de papier absorbant imbibée d’amylase (Maxillase) servant de témoin positif
• Déposez sur le gel une pastille imbibée d’eau distillée servant de témoin négatif.
• Laissez agir 20 minutes.
• Pour observer les résultats, il faut enlever les morceaux de banane et les pastilles
• Verser un peu d’eau iodée sur le gel.
• Prenez une photo, partagez-la; conservez-la pour votre compte-rendu

Fiche technique: identification des glucides

https://tribu.phm.education.gouv.fr/portal/pagemarker/5/cms/default-domain/workspaces/securite-dans-les-labo-svt/fiches-techniques/fiches-protocoles/reactifs-glucides/fp-mise-en-e-vidence.1658175520149?scope=__nocache&pageParams=&pagePath=%252Ffoad%252F_dyn_cG9ydGFsU2l0ZVpHVm1ZWFZzZEMxa2IyMWhhVzRfZV9kZDI5eWEzTndZV05sY3dfZV9lX2RjMlZqZFhKcGRHVXRaR0Z1Y3kxc1pYTXRiR0ZpYnkxemRuUV9lX2RabWxqYUdWekxYUmxZMmh1YVhGMVpYTV9l.Y21zOi9kZWZhdWx0LWRvbWFpbi93b3Jrc3BhY2VzL3NlY3VyaXRlLWRhbnMtbGVzLWxhYm8tc3Z0L2ZpY2hlcy10ZWNobmlxdWVz.X19OX18%253D.X19OX18%253D.X19OX18%253D%252F_CMS_LAYOUT&addToBreadcrumb=1

Expérience 2 :

Cette expérience permet de tester le type de sucre présent dans la banane mûre. (durée 30 minutes)

• Réalisez un jus de banane en écrasant un morceau de banane dans un mortier avec de l’eau
• Filtrer la solution pour enlever la pulpe
• Récupérer un peu de jus avec une pipette dans 2 tubes à essai
• Réaliser le test à la liqueur de Fehling (voir fiche technique): ajoutez 1 goutte de liqueur de Fehling puis placez au bain marie à 70°C
• Dans un autre tube, réaliser le test à l’eau iodée (voir fiche technique)
• Réaliser 1 tube témoin : introduisez un fond d’empois d’amidon dans un tube à essai avec une pipette Pasteur puis ajoutez 1 goutte d’eau iodée 
• Réaliser un 2e tube témoin: introduisez un fond d’empois d’amidon dans un tube à essai avec une pipette Pasteur puis ajoutez 5 gouttes d’amylase;
• Laissez agir 5 minutes; remuez légèrement
• Ajoutez une goutte d’eau iodée.
• Prenez une photo, partagez-la puis intégrez-la à votre compte-rendu

Expérience 3 :

Elle consiste à faire l’observation microscopique de la pulpe de banane.

Elle permet de mettre en évidence les amyloplastes de la banane et de montrer que le mûrissement du fruit entraine l’hydrolyse de l’amidon par l’action de l’amylase.

• Pour cela il suffit de monter entre lame et lamelle, de la pulpe de banane préalablement colorée à l’eau iodée diluée.
• Observer, photographier, partager, puis intégrez-la à votre compte-rendu