Les rayons Ultra-Violet B sont suspectés d’être mutagènes chez l’humain qui accumule les coups de soleil en été. Mutations après mutations, les grains de beauté deviennent des cancers de la peau que l’on appelle un mélanome (voir photo de droite). C’est la 1ere cause de mortalité chez la femme de moins de 30 ans.
On veut montrer que les rayons UV provoquent des mutations.
Comme on ne peut faire d’expériences sur les humains, on prend un être vivant plus simple et plus facile à cultiver: un champignon unicellulaire, la Levure de boulanger.
La souche de levure Ade 2 forme normalement des colonies rouges (voir photo de gauche) lorsqu’elle se développe sur un milieu nutritif gélosé.
Ce caractère héréditaire, la couleur rouge, est dû au fait que cette levure possède un allèle particulier du gène de la « couleur de la colonie » nommé Ade2.
La manipulation consiste à étaler des Levure sur des boîtes de Pétri et à les exposer à des durées croissantes d’irradiation aux UV-B.
L’action des UV-B se fait sur des cellules de levure isolées mais le résultat est visible à l’œil nu au niveau des clones (=cellules identiques issues de la division d’une même cellule-mère) obtenus après 5 jours de développement : une levure, en se multipliant va former une colonie.
Matériel:
- Un étaleur stérile
- Une pipette Pasteur stérile
- Une boîte de Pétri avec gélose stérile
- Un bec électrique
- Un feutre
- Du scotch
- Une MUTA-BOX produisant un rayonnement UV-B
- Une solution contenant une suspension de levure de la souche Ade-2
Méthode:
Le travail se fait en condition de stérilité:
- Attachez vos cheveux, enlevez vos bagues et bracelets
- Lavez-vous les mains avec du gel hydroalcoolique
- Allumez le bec électrique
- Travaillez dans un rayon de 20 cm autour du bec électrique
- Ne parlez pas
- Portez un masque
- Ne vous déplacez pas
- Ne posez pas d’ustensiles sur la table qui a été stérilisée à l’eau de javel
- En fin de manipulation, placez tous les instruments dans l’eau de javel
- Éteignez les bec électriques
Étalement des levures :
- Notez au feutre, au dos de chaque boîte votre nom
- Partagez le fond de la boîte en 4 secteurs (voir photo) correspondant à 4 temps d’exposition : 0s, 20s, 40s, 60s.
- Agitez la suspension de levures
- Ouvrez la boîte en déposant le couvercle à proximité du bec électrique
- Avec une pipette Pasteur stérile, versez 2 gouttes au centre de la boîte
- Avec un étaleur stérile, étalez les gouttes d’un mouvement circulaire répété comme si c’était de la pâte à crêpe
- Refermez rapidement la boîte
- Posez-la à l’envers sur le plan de travail
- Mettez la pipette Pasteur et l’étaleur dans l’eau de Javel
Irradiation des levures :
- Déplacez les boîtes vers la MUTA-BOX
- Ouvrez le tiroir de la MUTA-BOX
- Placez 2 boîtes
- Enlevez les couvercles et placez-les à l’envers à côté de la boîte de Pétri dans le tiroir
- Placez les couvercles dont un secteur à été découper de façon à irradier seulement la partie que vous souhaitez irradier
- Refermez le tiroir
- Réglez la durée d’irradiation voulue
- Appuyez sur le bouton démarrage
- A la fin, recommencez avec un autre secteur à irradier
- Lorsque tous les secteurs sont irradiés, replacez les couvercles d’origine
- Sortez les boîtes
- Refermez le tiroir
- Scotchez votre boîte
- Déposez-la dans la cuvette prévue a cet effet
Identification d’une mutation:
Pour trouver la Fiche Technique du logiciel de comparaison de séquences « geniegen2 », dans un moteur de recherche, tapez: « Tribu » puis « fiche technique Geniegen2 » ou bien cliquez sur le lien ci-dessous:
- Ouvrez le logiciel genigen2 en ligne: pour cela, dans un moteur de recherche, tapez « Geniegen2 »
- Afficher les séquences des allèles « Ade2Allele1.adn » et « Ade2Allele2.adn » en ouvrant le fichier « ade2.edi »
- Utiliser l’outil pour afficher le résultat de la comparaison des 2 allèles ;
- Identifiez la mutation
QCM:
1-La Levure est un :
a-champignon unicellulaire
b-champignon pluricellulaire
c-une bactérie unicellulaire
d-une bactérie pluricellulaire
2-La Levure est un :
a-procaryote unicellulaire
b-procaryote pluricellulaire
c-eucaryote pluricellulaire
d-eucaryote unicellulaire
3-Geniegen2 est un outil:
a-pour irradier les Levures
b-pour travailler en conditions stériles
c-pour comparer des séquences d’ADN
d-pour cultiver des Levures
4-La MUTA-BOX est un outil:
a-pour irradier les Levures
b-pour travailler en conditions stériles
c-pour comparer des séquences d’ADN
d-pour cultiver des Levures
5-La boîte inventée par Mr Pétri est un outil:
a-pour irradier les Levures
b-pour travailler en conditions stériles
c-pour comparer des séquences d’ADN
d-pour cultiver des Levures
6-Le bec électrique est un outil:
a-pour irradier les Levures
b-pour travailler en conditions stériles
c-pour comparer des séquences d’ADN
d-pour cultiver des Levures
Réponses:
1a; 2d; 3c; 4a; 5d; 6b
