TP / Colorer les vaisseaux conducteurs de la sève

Comment la sève circule-t-elle dans la plante ?

Les tissus conducteurs des plantes sont responsables du déplacement de la sève :
– les vaisseaux du xylème, assure le transport de la sève brute, prélevée au niveau des racines;
– les vaisseaux du phloème, assure le transport de la sève élaborée, produite au niveau des feuilles à partir des produits de la photosynthèse.

Ce TP a pour but de déterminer, par l’observation microscopique, la disposition des tissus conducteurs d’une racine, d’une tige et du pétiole de la feuille.

Pour cela, on retiendra que le colorant appelé Carmino-vert d’iode colore en vert la molécule de lignine et en rose la cellulose.

Matériel:

Biologique:

tiges et feuilles de céleri;
pousses de blé;
feuille de laurier;
racines de blé;

Pour réaliser les coupes:

Des bâtons de moelle de sureau,
Une lame de rasoir NEUVE ou un rasoir de coupe face plane,

Pour colorer les coupes:

Une allumette taillée en biseau pour aller à la pêche…
6 verres de montre,
De l’eau
De l’eau de javel (= hypochlorite de sodium),
De l’eau acétique : 1 volume d’eau dans un volume d’acide acétique
Du Carmino-vert d’iode (10 parties de carmin aluné + 1 partie de vert d’iode).

Pour observer des coupes:

Un microscope;
Des lames et lamelles

Méthodes:

Réalisation de coupes transversales de racines, tiges ou feuilles :

Réalisation de coupes longitudinales de tiges:

Réaliser des coupes très fines et transparentes, tangentiellement à l’épiderme de la tige;
Privilégier la finesse à la longueur;
Déposer ces coupes coté interne sur le dessus, au fur et à mesure, sur une lame dans une goutte d’eau;

Coloration des coupes:

On utilise en général pour cette coloration une solution commerciale de carmin-vert d’iode. Ceci simplifie la préparation du TP mais pose deux problèmes :

ces solutions ne sont pas toujours d’une qualité satisfaisante ;
la double coloration peut se révéler « inégale ».

Pour résoudre ces problèmes, le mieux est donc de procéder en deux temps : plutôt que de colorer en une fois, on colore d’abord au carmin aluné et ensuite avec le vert d’iode. Pour obtenir une coloration optimale, il est nécessaire de procéder à des essais en calculant le meilleur temps de coloration pour chaque colorant et pour les solutions dont on dispose (ces temps varient grandement selon les solutions).

Après avoir vidé les cellules à l’hypochlorite de sodium (eau de javel), il est important de :

très bien laver à l’eau = lavage abondant ;
finir par un lavage rapide à l’acide acétique dilué.

Ces deux points sont fondamentaux pour obtenir une bonne coloration.

La coloration carmin-vert d’iode n’est pas une coloration spécifique de la lignine et de la cellulose, ces colorants ont seulement une affinité plus prononcée vis-à-vis de ces composés chimiques. Ainsi, en présence de seul carmin aluné tout est coloré en rouge, et réciproquement tout est coloré en vert par le vert d’iode : c’est l’association des deux colorants qui aboutit à une coloration différentielle des tissus.

En conséquence, des mauvaises proportions (utilisation d’une seule solution) ou des mauvais temps de coloration (utilisation de deux solutions) peuvent conduire à des colorations peu nettes, voir même inversées…

Porter les coupes à l’aide de l’allumette taillée en biseau, dans un verre de montre rempli d’eau.
Transférer ensuite les coupes dans les différents verres de montre en respectant les temps indiqués;
Eau de Javel : 10 min
Eau de rinçage : 3x1min
Eau acétique : 1 min
Carmin vert : 3 min
Lavage eau distillée

Résultat :

Morceaux choisis produits par des élèves de T spécialité SVT

D’après planet-vie.ens.fr :

Montage entre lame et lamelle:

Observations microscopiques:

Réalisez des captures d’images.
Légendez vos images;
Partagez vos images.

Résultat obtenu par une élève de T spé:

Sur une coupe longitudinale de tige de céleri, on distingue une zone en forme de spirale légèrement verdâtre: ce sont les vaisseaux du xylème. En rose à proximité de la zone verte, on trouve les vaisseaux de la sève élaborée.