TP : Mise en évidence de la spécificité antigène/anticorps grâce au test d’Ouchterlony

Principe du test:

C’est une méthode d’immunodiffusion sur gel : les solutions déposées dans les puits creusés dans le gel diffusent de façon homogène dans toutes les directions autour du puits. Deux auréoles de diffusion peuvent donc entrer en contact lorsqu’elles ont suffisamment progressé. Cette zone de contact reste invisible s’il n’y a pas de réaction entre les deux solutions. Quand il y a réaction entre les solutions, il se forme un arc de précipitation visible à l’œil nu. Celui-ci est dû à l’interaction entre de nombreux anticorps et les antigènes spécifiques de ces anticorps selon une reconnaissance de type clé serrure.

Recherche à mener:

On cherche à déterminer si l’un des produits anti-venin déjà existant sur le marché peut neutraliser le venin de la vipère Vipera walser.

Matériel à disposition

• Une solution S de venin de Vipera walser
• Une solution O contenant un sérum de chèvre immunisée contre le venin de Vipera aspic
• Une solution C contenant un sérum de chèvre immunisée contre le venin de Vipera kasnokovi
• Une solution L contenant un sérum de chèvre immunisée contre le venin de Vipera ursinii
• Une solution B contenant un sérum de chèvre immunisée contre le venin de Vipera berus
• De l’eau distillée nommée E
• Une micropipette avec cônes jaunes
• 1 feutre
• 1 boite de Pétri
• 1 tu be creux servant d’emporte-pièce pour creuse des puits dans le gel
• 1 pic en bois pour sortir délicatement le gel du puits
• Un bec électrique
• Une balance électronique
• Un bécher en verre
• De la poudre d’agar-agar
• Une spatule
• Un agitateur
• Un gant
• Une pince en bois pour éviter de se brûler

Protocole:

Préparation du milieu de dépôt pour deux boîtes de Pétri:

• Prélevez 0,3g d’agar-agar à l’aide de la spatule
• Mélanger ces 3g à 30ml d’eau distillée dans le bécher et bien mélanger avec un agitateur
• Chauffez le mélange tout en remuant jusqu’à ce qu’il devienne limpide mais en évitant l’ébullition
• Laissez refroidir le bêcher légèrement
• Puis répartissez ce mélange dans 2 boites de Pétri en ayant une épaisseur de 5mm environ
• Laisser refroidir et solidifier sur la paillasse

Manipulation:

• Posez la boîte de Pétri sur le gabarit fourni et percez 6 puits dans le gel à l’aide de l’emporte-pièce
• Enlevez la gélose de chacun des puits à l’aide de l’aiguille lancéolée ou du cure-dent
• Notez au feutre, à l’envers de la boîte, l’emplacement des différentes solutions: S au centre, puis les autres autour
• Remplir chaque puits avec le produit approprié à l’aide de la micro-pipette sans déborder et sans endommager le gel

Résultat: